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standard DIA蛋白組學建庫

斯坦德集團是測試、研發(fā)、認證服務的行業(yè)推動者。作為一家長期與各企事業(yè)單位合作的中國大型檢測研發(fā)機構，我們高效幫您處理管控企業(yè)風險、提高產(chǎn)品質量、提高課題通過率以及備案通過率等問題，我們專業(yè)為您及您的企業(yè)提供多領域測試、研發(fā)、認證服務。

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項目流程

DIA 技術是目前主流的蛋白質組學定量技術，它采用DIA（Data Independent Acquisition，數(shù)據(jù)非依賴采集）技術進行數(shù)據(jù)采集，將整個質譜掃描質量范圍分為若干小窗口，依次對每個窗口的所有離子進行碎裂，使其能夠對掃描區(qū)間內的所有肽段離子進行高速一級 MS 掃描再進行二級 MS/MS 分析。因此，DIA 能夠對復雜樣品中幾乎所有可檢測的分子進行定量測定。DIA 綜合了 shotgun proteomics 高通量檢測的特點與精準定量分析的優(yōu)勢，是真正意義上的全景質譜檢測手段。

DIA蛋白組學項目流程

圖7.jpg

技術流程

提取樣品中總蛋白，取出一部分做蛋白濃度測定及 SDS-PAGE 檢測，另取部分進行胰蛋白酶酶解，對酶解肽段除鹽之后，對樣品進行 LC-MS/MS 鑒定。LC-MS/MS 鑒定分為兩個主要步驟，第一步采用傳統(tǒng)的 DDA 方法建立蛋白譜圖庫，第二步采用 DIA 技術采集每個樣品的質譜數(shù)據(jù)，在 DDA 數(shù)據(jù)庫的基礎上進行譜圖匹配、定量信息的提取以及后續(xù)統(tǒng)計分析等。

技術優(yōu)勢

①全景掃描，數(shù)據(jù)覆蓋度高；②樣品種類不限，數(shù)量不限制；③重復性好，穩(wěn)定性好，數(shù)據(jù)可回溯；④尤其適合大隊列樣本，血清樣本；

數(shù)據(jù)分析

圖8.jpg

檢測項目

送樣要求

蛋白檢測樣品量要求
實驗類型	DIA
樣品類型	建議量	最低量	生物學重復
動物組織	200mg	50mg	≥3
動物毛發(fā)等	200mg	50mg	≥3
軟骨組織	500mg	200mg	≥3
植物莖、葉、花等	300mg	200mg	≥3
樹根、樹皮	1000mg	500mg	≥3
鮮果肉	20g	10g	≥3
菌類（菌體沉淀）	500mg	200mg	≥3
	（10^7）		≥3
懸浮/貼壁細胞	≥1×10^7	≥5×10^6	≥3
血清/血漿	≥500 μL	200 μL	≥3
腦脊液等體液	10ml	5ml	≥3
蛋白溶液	500ug	200ug	≥3
蛋白干粉	150ug	100ug	≥3
蛋白組學送樣注意事項
1.建議所有樣品提供原樣即可，特殊需自己提取蛋白的，請附上詳細的操作流程及試劑。
2.樣品-80℃保存，避免凍融，在寄送時請保證干冰量充足。
3.樣品標記清晰明確，與樣品信息單中保持一致。
4.如果樣品成分含有毒性或腐蝕性物質，必須事先聲明，并在樣品登記表和樣品標簽上注明。
5.如果樣品為病原性微生物或者具有侵染性的病變組織必須嚴格滅活后再送樣并在樣品登記表和樣品標簽上注明。此項非常重要請務必重視??！
6.物種不同會導致樣本量收集難度不同，如不清楚量是否足夠，請?zhí)崆白稍儭?/td>
7.生物學重復的樣品請備注清楚；如條件允許，請將每個樣品的量在樣品信息單中表明。
8.注修飾類請單獨咨詢。